（一）原理
E-test法药敏试验是一种抗菌药物浓度梯度稀释法直接测量MIC的方法，即浓度梯度（多点药物浓度法）琼脂扩散试验。是一种结合了稀释法和扩散法的原理和特点测定微生物对抗菌药物的敏感度的定量技术。其原理基本同扩散法，即浓度呈连续梯度的抗菌药物从具有浓度刻度的塑料试条中向琼脂中扩散，在试条周围抑菌浓度范围内受试菌的生长被抑制，从而形成透明的抑菌圈，无明显细菌生长处的浓度刻度值即为受试菌的MIC。
（二）方法
1．培养基、接种物制备和接种同纸片扩散法。
2．E-test条的存储与使用E-test药敏纸条与干燥剂一起置-20℃冰箱保存备用，每次使用前先室温平衡30min后再开启E-test条容器或者包装，以免冷凝水浸湿纸片而使其效价降低。
3. 贴E-test条同纸片扩散法。按说明书要求将E-test条贴于已涂布菌液的琼脂平板上。直径150mm的平板内可放置6条E-test条，90mm者一般只能放置1条，最多两条E-test条。贴两条时，应将高、低浓度对贴，以减小抑菌圈相互干扰。可用镊子或专用贴条器材进行贴条。
4．孵育时间和温度同纸片扩散法。
5．结果读取注意事项：
（1）E-test条两侧的抑菌圈与试条相交处如介于试条上所示两刻度之间时，应读取较高的数值。
（2）E-test条两侧的抑菌圈与试条相交不一致时，读取数值较高的一侧所示的读数。
（3）沿E-test条边缘生长的纤细细菌线在阅读结果时可以忽略不计。
（4）在抑菌圈内出现大、小菌落生长或者双抑菌圈时，应读生长物被完全抑制的部分与E-test条相交处的读数。
（5）当抑菌圈在与E-test条相交处呈凹下延伸时，阅读凹下起始处切线与E-test条相交处的读数。
（三）质量控制
同稀释法药敏试验方法。
（四）注意事项
1．贴E-test条时，应刻度面朝上，不得贴反。一旦药面接触琼脂后绝对不得再移动，因为抗菌药物会在数秒钟内渗入琼脂中。
2．E-test条非常薄，贴试条时要仔细检查，防止同时贴入两条试条。若贴两条，应立即轻轻取出上面的一条，还可使用。
3．贴条时应注意试条下面是否压有气泡，气泡会影响药物的均匀扩散，影响实验结果，可用挤压的方法捻出气泡。
4.平板和E-test条储存要求同纸片扩散法。